Fehérjevizsgálati módszerek

TARTALOM A fehérjeanalitikai alapmódszerek alkalmazási területe (Dr. Kerese István) 11 A fehérjeanalitikai munkák általános ismertetése 12 Előkészítő munkák 12 Elválasztástechnikai munkák 14 Meghatározási munkák 15 Metodikai példák 17 Irodalom 22 Általános laborítóriumi módszerek (Dr. Gáspár László) 24 Általános laboratóriumi munkák a vizsgálati anyagok előkészítésére 24 Mintavétel 24 A minták homogenizálása 27 Száraz, szilárd anyagok aprításának eszközei 27 Nedves, szilárd anyagok aprításának eszközei 28 A vizsgálati anyag koncentrálása és szárítása 29 Koncentrálás és szárítás vákuumbepárlással 29 Szárítás liofilizálással 33 Fehérjeoldatok készítése 36 Szöveti fehérjék kioldása 36 Szöveti fehérjék kisajtolása 38 Fehérjeoldatok szűrése, koncentrálása szűréssel 38 Szűrés és szűrők 38 Ultraszűrés 40 Kis molekulasúlyú anyagok szűrése dialízissel, elektrodaialízissel 40 Centrifugálás és centrifugák 44 A fehérjeanalitikai laborítórium egyéb fontos eszközei 46 Meghatározások a vizsgálati anyagok általános jellemzésére 48 Szárazanyag-tartalom meghatározása 48 Hamutartalom meghatározása 51 Zsírtartalom meghatározása 51 Nitrogéntartalom meghatározása Kjeldahl-módszerrel 52 A Kjeldahl-féle roncsolás 52 A roncsolásban képződött ammónia meghatározása titrálással 57 A roncsolásban képződött ammónia meghatározása fotometriásan 60 Nitrogéntartalom meghatározása égetéssel 64 A vizsgálati anyag nemfehérje-nitrogén (NPN) tartalmának meghatározása 65 Fehérjemeghatározási módszerek 65 Spektrofotometriás eljárások ultraibolya tartományban 66 Spektrofotometriás és kolorimetriás eljárások a látható fény tartományában 67 Fehérjemeghatározások festékkötődéssel 70 Turbidimetiás eljárások 71 Fluorometriás eljárások 72 Refraktometriás eljárások 73 Polarimetriás eljárások 73 Általános jellegű irodalom 74 Irodalom 74 Elektroforézis (Dr. Takács Ödön) 77 Az elektroforézis alapjai, az elektroforézis metodikai formái 77 A poliakrilamid-gél elektroforézis (PAGE) 79 A PAGE alapjai 79 A PAGE vegyi anyagai 82 Az akrilamid és biszakrilamid 82 Katalizátorok 82 Detergensek 82 Pufferoldatok 83 A PAGE analitikai alkalmazása 84 Analitikai készülékek 84 A gél készítése 85 Gélpálcák készítése 91 Géllapok készítése 93 A fehérjeminta készítése és gélre vitele 94 A gél-elektroforézis folyamata 95 A gél kivétele elektroforézis után 96 A gél fixálása, festése és mosása 96 A leggyakrabban használt festési módszerek 98 Specifikus festések 99 A proteinogram kiértékelése 100 Direkt-értékelés UV-fényben 100 Fluorometriás kiértékelés 101 Festett proteinogramok kiértékelése 101 A gél frakcionálása 101 A gélek megőrzése, tárolása 102 Az egydimenziós elektroforetogramok interpretálása 102 Speciális PAGE-alkalmazások 103 Gradiens PAGE 103 A detergens Page alkalmazása molekulasúly-meghatározáshoz 103 Radioizotopokkal jelzett, fehérjéket tartalmazó gél nukleáris feldolgozása 106 Enzimek specifikus kimutatása 106 Immunológiai alkalmazások 107 Kétdimenziós elválasztások 107 Mikro-disc-elektroforézis 108 Preparatív módszerek fehérjefrakciók kinyerésére 109 A PAGE alkalmazása és eredményei 109 A PAGE alkalmazása a biokémiai kutatásban 109 A PAGE alkalmazása az élelmiszer- és takarmányfehérje-kutatásban 110 A PAGE klinikai-kémiai alkalmazása 113 Az izoelektromos fokuszálás 114 Elektrofókuszálás oszlopmódszerrel 115 Szacharóz gradiens 115 Izoelektromos fokuszálás poliakrilamid-gélben 115 Elelktrofokuszálás géllapon és vékonyrétegen 116 Izotachoforézis 117 Irodalom 119 Oszlopkromatográfiás módszerek (Dr. Kerese István) 123 Fehérjék és peptidek oszlopkromatográfiája 124 Adszorpciós oszlopkromatográfia és alkalmazási területe 124 Megoszlásos oszlopkromatográfia és alkalmazási területe 126 Az ioncserés oszlopkromatográfia és alkalmazási területe 127 Kromatografálások ioncserélő műgyantákkal 128 Kromatografálások cellulóz alapú ioncserélőkkel 133 Kromatografálások ioncserélő gélekkel 139 Egyéb kromatográfiás módszerek 140 Aminosavak oszlopkromatográfiája 143 A vizsgálati anyag előkészítése kromatografáláshoz 144 A minta hidrolizálása 144 Savas hidrolízis 145 Lúgos hidrolízis 150 A deproteinizálás 152 Aminosavak oszlopkromatografálása 154 A kromatografálás technikai feltételei 155 A gyantaoszlop 155 A pufferoldatok készítése 157 A ninhidrinoldat készítése 158 Az analizátor 160 A kromatografálás 161 A kromatogramok értékelése 172 Speciális kromatográfiás metodikák 172 Az aminosavak ioncserés oszlopkromatográfiájának fejlődési irányai 175 Irodalom 177 Gélkromatográfia (Dr. Kalász Huba) 183 A gélkromatográfia alapjai 183 Gélek, géltípusok és jellemzőik 184 A kromatográfiás műveletekhez használt gélek ismertetése 185 Gélkromatográfiás készülékek és használatuk 194 Gélkromatográfiás számítások 199 Elméleti tányérszám és szeparálódás 203 Gélkromatográfiás kísérletek előkészítése és metodikája 205 A gél előkészítése 205 A gélkromatográfiás oszlop töltése 205 A gél szennyeződésének elkerülése, a szennyezett gél tisztítása 206 Az oszlop és a minta méretei 206 Reciklizációs gélkromatográfia 208 A minta térfogatának hatása a szeparálásra 213 A gélkromatográfia alkalmazásának fő területei 215 Gélkromatográfiás molekulasúly-mérés 215 Kötődési - komplexképződési folyamatok vizsgálata 220 Preparatív csoportszeparálások 222 Preparatív frakcionálások 223 Peptidek gélkromatográfiás tisztítása 233 Aminosavak gélkromatográfiája 233 Egyéb gélkromatográfiás eljárások 238 Gélkromatográfia szerves oldószerben 238 Zónakicsapásos eljárás 239 Centrifugálásos eljárások 239 Ioncserés gélkromatográfia 240 Affinitási gélkromatográfia 240 Irodalom 243 Fehérjék, peptidek és aminosavak rétegkromatográfiája (Tyihák Ernő) 244 A rétegkromatográfia technikája 244 Fehérjék rétegkromatográfiája 248 Fehérjék elválasztása gélrétegen 248 Fehérjék elválasztásának lehetőségei szerves és szervetlen alapanyagú rétegen 253 A peptidek és peptidszármazékok rétegkromatográfiája 255 Peptidek elválasztása szervetlen és szerves alapanyagú rétegen 255 A peptidek elektrokromatográfiája 259 Peptidek és peptidszármazékok kimutatási reakciói 260 Aminosavak és rokonvegyületek rétegkromatográfiája 263 Elválasztás szervetlen alapanyagú rétegen 263 Aminosavak elválasztása cellulózrétegen 268 Aminosavak elválasztása ioncserélő rétegen 269 Aminosavak elválasztása zsugorított (színterelt) szilikagélrétegen 273 Aminosavak elektrokromatográfiája 274 Aminosavak kimutatása rétegkromatogramokon 275 Szilikagél alapú rétegek 275 Cellulóz alapú rétegek 276 Ioncserélő gyantát tartalmazó rétegek 276 Aminosavak színreakciói ninhidrinnel 276 Az aminosavak félkvantitatív és mennyiségi meghatározása 277 A rétegkromatográfia felhasználása peptidek és fehérjék szekvencia-analíziséhez 280 2,4-dinitro-fenil (DNF)-aminosavak vizsgálata 280 A danzil (Dns)-, pizil- és banzil-aminosavak rétegkromatográfiás vizsgálata 285 A fenil-tiohidantoin (PTH)-aminosavak rétegkromatográfiája 289 Irodalom 292